mRNA是由DNA的一條鏈作為模板轉錄而來的、攜帶遺傳信息的能指導蛋白質合成的一類單鏈核糖核酸。真核細胞的mRNA分子最顯著的結構特征是具有5’端帽子結構（m7G）和3’端的Poly(A）尾巴。絕大多數哺乳類動物細胞mRNA的3’端存在20-30個腺苷酸組成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。這種結構為真核mRNA的提取，提供了極為方便的選擇性標志。

Biolinkedin^? Oligo (dT)₂₅磁珠設計用于從真核總RNA或直接從細胞，動植物組織的粗提物中快速分離高度純化的完整mRNA。分離的mRNA可直接用于大多數下游應用中分子生物學：RT-PCR，固相cDNA文庫構建，S1核酸酶分析，核糖核酸酶保護測定，引物延伸，點和槽雜交，體外翻譯實驗，RACE，減性雜交，northern分析，基因克隆和基因表達分析。

Biolinkedin^? Oligo (dT)₂₅磁珠使用依賴于mRNA的Ploy(A)尾部與磁珠表面的Poly(T)序列之間的堿基互補配對。利用標準雜交條件，可以很容易地將含有Poly(A)的mRNA結合到oligo-dT上面，其他RNA種類(rRNA和tRNA)不包含poly(A)序列，因此不會與oligo-dT磁珠結合。可以在15分鐘內完成，而無需準備總RNA或執行任何其他純化步驟。

特點

1.      快速溫和的程序可獲得完整的純 mRNA

2.      高純 mRNA 分離，cDNA 合成上游的最佳選擇

3.      高靈敏度的 mRNA 分離可以用超小量的初始樣品合成 cDNA 和構建 cDNA 文庫。（可以用單細胞構建 cDNA 文庫）

Biolinkedin^? Oligo (dT)₂₅磁珠能特異地靶向并捕獲多種粗提初始樣品的 mRNA 轉錄組。棄除不與磁珠結合的核糖體 RNA、DNA、蛋白質和小 RNA 分子（例如轉運 RNA、micro RNA 和小核仁 RNA）。只捕獲多聚腺苷酸化的 RNA (mRNA)。可分離出純 mRNA，無需進行核糖體 RNA 消除或提取后的 DNase 處理。

應用領域

l   基因克隆

l   cDNA 合成、cDNA 文庫構建

l   RT-PCR、定量 RT-PCR

l   RPA（核糖核酸酶保護試驗）

l   消減雜交

l   斑點/狹線雜交

l   引物延伸

成分組成

實驗流程

1.     以下實驗方案針對純化75ugTotal RNA，根據需要可以按比例放大。

2.     取50uL含有75ug Total RNA ,65°C孵育2min，打開RNA二級結構，結束后迅速置于冰上。

3.     將50μL總RNA溶液加入至50μL洗滌后的磁珠,吹打混合均勻。即每75μg總RNA使用1mg洗滌后且溶于50μL結合緩沖液的磁珠結合。

4.     將上述混合液室溫下旋轉混合10∽15min。

5.     磁性分離，靜置1min，去上清。

6.     室溫下用200uL洗滌液清洗磁珠，小心吹打混勻，磁性分離，去除可能的污染物。重復操作一次。

7.     加入10～20μL 10mM Tris-HCl pH7.5或RNase-Free H₂O，65∽75°C孵育2min，然后快速將含有mRNA的上清液轉移到新的Rnase-free EP管。

Biolinkedin^? Oligo(dT)₂₅磁珠純化mRNA示意圖

Biolinkedin^? Oligo (dT)₂₅純化試劑盒可應用于mRNA的純化，通過親和結合mRNA的poly A尾巴進行純化，大大簡化了mRNA的捕獲過程。具有耐受高鹽、高pH和高溫，使用簡單，不需使用任何易燃、有毒的試劑。

實驗案例

針對2ug 小鼠Total RNA進行mRNA純化，以等量初始總RNA為對照，通過Real-time PCR檢測以評估mRNA捕獲效率。

檢測基因：GAPDH

實驗結果：

擴增曲線

溶解曲線

CT值

Biolinkedin相關產品推薦

Biolinkedin今天就分享到這里啦，有興趣的小伙伴可以關注我們公眾號，和我們隨時交流。