一、首個CAR-T+mRNA疫苗治療實體瘤臨床

近日，BioNTech公司在美國癌癥研究協會（AACR）2022 年會上公布了其CAR-T療法BNT211作為單藥治療和聯合治療，用于Claudin6陽性實體瘤的1/2期臨床初步數據。

BNT211的聯合用藥治療方案，即CAR-T+CARVac，首先輸注低劑量的自體Claudin6 CAR-T細胞治療BNT211，然后用CAR-T細胞擴增mRNA疫苗CARVac多次給藥來提高CAR-T細胞的數目、持久性和活性。

▲ 圖片來源：BioNTech

CARVac（CAR-T cell Amplifying RNA Vaccine）是一種攜帶抗原編碼RNA的脂質體復合物（RNA-LPX），可與CAR-T療法進行聯用，解決CAR-T療法面臨的持久性、實體瘤、安全性等問題。

CARVac的設計利用了mRNA編碼與CAR-T細胞相同的靶抗原，通過讓抗原呈遞細胞也表達相同的抗原，促進CAR-T的激活和擴增。同時，低劑量的CAR-T也可以限制其毒性和副作用。

▲ CARVac多次給藥能夠將CAR-T細胞數量維持在安全有效的治療窗內（圖片來源：Science）

總體而言，這些初步數據顯示，Claudin6 CAR-T細胞療法單藥治療，以及CAR-T+CAR-Vac聯合治療是安全的，并且對Claudin6陽性實體瘤患者顯示出了有潛力的治療效果。

二、mRNA的創新應用進展

2021年2月24日，《MIT Technology Review》發布了“全球十大突破性技術”名單，其中榜首即是mRNA疫苗。從2019年12月新冠爆發到2022年4月1號，全球新冠確診已超4.8億。新冠病毒的蔓延促進了mRNA疫苗的發展。mRNA疫苗在新冠疫苗開發方面的成功，也促進了其在各種傳染病與腫瘤等治療方面廣闊的應用前景。

mRNA疫苗因為新冠而聲名大噪，但在其他領域疾病中的應用前景也同樣巨大，例如腫瘤治療、自身免疫性疾病、其它傳染病等。同時，也有越來越多基于mRNA的新技術展現出頭角，使其應用潛力進一步擴大。以下提供了mRNA領域巨頭BioNTech和Moderna近期公布的主要進展。

今年3月，Moderna公司宣布，其針對人類免疫缺陷病毒（HIV）的三聚體mRNA疫苗mRNA-1574的1期臨床試驗（HVTN 302）已經完成首例患者給藥。

HVTN 302是一項開放標簽、多中心、隨機的1期臨床試驗（NCT05217641），旨在評估mRNA-1574的安全性和免疫原性。主要驗證表達HIV衣殼蛋白三聚體的mRNA疫苗在未被感染的個體中具有良好的安全性和耐受性，并且可以激發針對HIV的中和抗體。

今年2月，Moderna公司宣布，數據和安全監測委員會（DSMB）已批準其預防呼吸道合胞病毒（RSV）的候選疫苗mRNA-1345開展關鍵性3期臨床試驗。此次DSMB的認可來自于對mRNA-1345的初步2期臨床試驗數據的獨立審評。

mRNA-1345是一種編碼RSV融合前F糖蛋白的疫苗，與融合后狀態相比，可引起更高的中和抗體反應。mRNA-1345使用與Moderna的新冠疫苗相同的脂質納米顆粒（LNP），包含優化的蛋白和密碼子序列。

今年1月，BioNTech/輝瑞和Moderna公司分別公布了其mRNA疫苗在傳染病領域開發方面的新進展。

1） 輝瑞和BioNTech宣布達成了一項新的合作協議，以開發一種帶狀皰疹mRNA疫苗。根據協議，雙方將利用輝瑞專有的抗原技術和BioNTech的mRNA平臺技術開發帶狀皰疹mRNA疫苗，臨床試驗將于2022年下半年開始。

▲ BioNTech mRNA傳染病疫苗管線

2） Moderna公司宣布其治療愛潑斯坦-巴爾病毒（EBV）的候選疫苗mRNA-1189已經完成1期臨床試驗的首例患者給藥。mRNA-1189旨在預防EBV激發的傳染性單核細胞增多癥，并且潛在預防EBV感染。它由四種mRNA組成，并編碼不同的EBV衣殼糖蛋白（gH，gL，gp42，gp220）。目前，全球尚無獲批的EBV疫苗或預防傳染性單核細胞增多癥的疫苗。

三、mRNA疫苗技術關鍵原料-oligo-dT磁珠、SA磁珠

疫苗mRNA因為長度較大，為幾千個核苷酸，而無法直接進行檢測，因此需要將5’ cap和3’ poly(A)端酶切成短片段，酶切之后5’ cap和3’ poly(A)均可以通過納米磁珠進行高通量、快速分離，這種納米磁珠通常粒徑在0.2-5μm之間。

測定加帽效率主要是通過將5’cap端與生物素標記的引物退火，然后將5’cap端酶切成小片段，通過SA磁珠捕獲出biotin標記部分，然后將5’cap從磁珠表面洗脫，通過毛細管凝膠電泳或質譜法進行檢測。

3’ PolyA尾的檢測方法與5’加帽效率的檢測方法類似，需要通過酶切的方式獲得3’端的Poly A尾短鏈，然后利用Oligo dT磁珠分離純化，再分別進行毛細管電泳或質譜準確分析其長度分布。

在mRNA的5’端加帽效率和3’加尾分布的檢測過程中，都需要磁珠進行mRNA片段的富集。磁珠的性能影響到整個檢測數據的準確性和可靠性，該過程中的磁珠一般需要如下的特征：

a) 非特異性吸附低；

b) 靈敏度高，磁珠表面具有豐富的結合位點；

c) RNA易洗脫，磁珠表面需要特殊的封閉；

d) 耐受有機溶劑，部分操作會使用95%乙醇，對磁珠的溶劑耐受性有很大的要求。