緩沖體系在蛋白制備純化過程中非常重要，合適緩沖液能確保蛋白活性和結構穩定。為了滿足蛋白后續純化，往往需要對緩沖液進行置換。下面介紹幾種常見的純化場景，

場景一：針對分泌表達蛋白或抗體，其存在于培養基或腹水中，相對成分復雜，后續純化需要置換緩沖體系，避免影響親和純化的效率。

場景二：有些蛋白經過親和純化后需要進行進一步純化（如離子交換層析），在進行離子交換之前需要將鹽離子降低或pH調整，此時需要置換緩沖液。

場景三：蛋白經過離子交換層析后，還需要進行下一步離子交換層析需要調整pH，此時需要置換緩沖液。

場景四：對于包涵體復性純化，因含有變性劑（鹽酸胍或尿素等）需要去除避免影響下游純化，此時需要置換緩沖液。

針對上述情況，可采取如下常用方式：

常規方法主要有透析，超濾和凝膠過濾層析。

A    .透析法

這種方法主要利用透析袋小分子能通過而蛋白質大分子不能透過半透膜的原理。一般12 - 24h透析2 - 4次可完成對緩沖液的置換。該方法實驗室比較常用，樣品回收率高，操作簡單，成本低廉。

透析袋的選擇：

1.1 首先確定透析袋的分子量

在選擇適合截留分子量之前，首先要明確：欲保留在透析袋中的樣品和想要除去的雜質的分子量。

1.2 選擇普通型，再生型或者纖維素透析袋

確定好分子量之后，根據實際情況，樣品溶劑等，選擇透析袋。

1.3正確選擇扁平寬度

透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快；較大的透析管因擴散距離較長透析較慢。為易于使用，建議使用總長（包括閉合夾和頂部空間）為大約10 - 15cm的透析袋。

B.超濾

超濾屬于膜分離技術，主要借助超濾膜完成分離介質的作用，以超濾膜兩側的壓力差為動力，結合料液中各組分在高分子膜中傳輸的不同點，對原有的物質進行分析，分級和純化，從而達到脫鹽濃縮的作用。

超濾法可以選擇超濾管，超濾杯，以及工業級的超濾系統。

實驗室超濾管的選擇：

超濾離心管的選擇主要根據要截留那部分物質，選擇比最小分子量小的，如果要截留35 KD的蛋白，就可以選擇10 kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10 kD左右，則可以用截留分子量3 kD的超濾管。

C凝膠過濾層析

主要利用不同的溶質因不同程度進入介質而在液相中停留時間不同，凝膠的孔徑和溶質分子大小的關系決定了層析時該溶質在層析柱中的保留時間，不同的物質因保留時間不同而分離。比如Sephadex G-25 凝膠過濾介質應用于生物大分子的脫鹽和緩沖液置換，特別是在離子交換及親和層析后脫鹽及緩沖液置換中比較常用。

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